Prueba de

Coombs

Historia de la prueba de Coombs:

La prueba de Coombs primero fue descrita en el año de 1945 por un inmunologista llamado Robín Coombs (después de quién se nombra) de Cambridge y Arturo Mourant que

colaboro en esta. Históricamente, esta prueba se realizo in vitro. Es una prueba que busca anticuerpos que puedan fijarse a los glóbulos rojos y causar su destrucción prematura (hemólisis).

FUNDAMENTO.- Permite demostrar la presencia de anticuerpos incompletos mediante el uso de un segundo anticuerpo, que es una antiglobulina.

Hay dos formas de realizar la prueba de Coombs: directa e indire

cta.

La prueba de Coombs directa se utiliza para detectar anticuerpos que ya se han fijado a la superficie de los glóbulos rojos. Muchas enfermedades y fármacos (quinidina, metildopa y procaina

mida) pueden llevar a la producción de estos anticuerpos. Estos anticuerpos algunas veces destruyen los glóbulos rojos y causan anemia. Esta prueba algunas veces se lleva a c

abo para diagnosticar la causa de anemia o ictericia.

La prueba de Coombs indirecta busca anticuerpos circulantes l

ibres contra una serie de glóbulos rojos estandarizados. Esta prueba

indirecta sólo se usa rara vez para diagnosticar una afección médica y, con más frecuencia, se utiliza para determinar si una persona podría tener o no una reacción a una transfusión de sangre.

PRUEBA DE COOMBS O PRUEBA DIRECTA

La prueba directa detecta Ac ya fijados a los hematíes y para ello

se enfrentan los hematíes del paciente con antiglobulina. Se utiliza para detectar la enfermedad hemolítica del recién nacido y para otras anemias hemolíticas

El suero de Coombs puede ser de dos clases: poliespecífico, si está dirigido contra la Ig G y el componente C3d del complemento, y monoespecifico, si solo está dirigido contra la Ig G y algunos de los componentes del complemento.

MATERIAL:

· Gradilla.

· Centrifuga.

· Tubos de ensayo.

· Suero fisiológico.

· Pipetas Pasteur.

· Suero Coombs.

· Suspensión de hematíes problema

TÉCNICA

 Preparar una suspensión al 5% en solución salina.

 Colocar 1 gota de suero de Coombs en 1 tubo.

 Añadir 1 - 2 gotas de la suspensión.

 Mezclar y centrifugar 1-2 min. a 2000 r.p.m.

 Sacar de la centrifugadora y resuspender el botón celular y observar si hay o no aglutinación.

ü Si hay aglutinación, hay Ac incompletos

VALORES NORMALES

La falta de agrupación de células (aglutinación), indicando que no hay anticuerpos para los glóbulos rojos, es lo normal.

Los rangos de los valores normales pueden variar ligeramente entre diferentes laboratorios. Hable con el médico acerca del significado de los resultados específicos de su examen.

Una prueba de Coombs directa anormal (positiva) significa que usted tiene anticuerpos que actúan contra sus glóbulos rojos, lo cual puede deberse a:

• Anemia hemolítica autoinmunitaria sin otra causa
• Leucemia linfocítica crónica u otro trastorno linfoproliferativo
• Anemia hemolítica inducida por fármacos (muchos fármacos han sido asociados con esta complicación)
• Eritroblastosis fetal (enfermedad hemolítica del recién nacido)
• Mononucleosis infecciosa
• Infección por micoplasma
• Sífilis
• Lupus eritematoso sistémico u otra afección reumatológica
• Reacción a transfusión como la ocasionada por unidades de sangre cotejadas de manera impropia

Esta prueba también es anormal en algunas personas sin una causa clara, especialmente entre los ancianos. Hasta el 3% de las personas que están hospitalizadas sin un trastorno sanguíneo conocido tendrán un resultado anormal en la prueba de Coombs directa.

PRUEBA INDIRECTA DE LA ANTIGLOBULINA HUMANA O TEST DE COOMBS INDIRECTO

Fundamento

Se pretende detectar generalmente la presencia en el suero del enfermo de Ac incompletos libres.

Se incuba el suero del paciente con unos hematíes tipo (GR que no tienen adheridos a su superficie ningún tipo de Ig y ningún componente del complemento)

La finalidad de esta incubación consiste en lograr una sensibilización in Vitro de los hematíes tipo por parte de los Ac incompletos que pueden estar contenidos en el suero problema. Los hematíes tipo que se suelen utilizar con los 0+.

MATERIAL

· Gradilla. Centrifuga.

· Tubos de ensayo.

· Solución salina.

· Pipetas Pasteur.

· Suero Coombs.

· Suspensión de hematíes al 5%

TÉCNICA

 Preparar una suspensión de hematíes tipo al 5% en solución salina.

 Colocar en 1 tubo 2 gotas de los hematíes tipo y 2 gotas de suero problema.

 Mezclar e incubar a 37ºC durante 30 min.

 Lavar 3 veces el producto incubado en solución salina.

 Tras el último lavado resuspender el sedimento de hematíes.

 Añadir 2 gotas del suero Coombs.

 Mezclar bien y centrifugar a 2000 r.p.m. 1-2 min.

 Agitar el tubo y observar si hay o no aglutinación.

RESULTADOS

ü Si existe aglutinación tiene Ac - incompletos.

ü Si no existe aglutinación no tiene Ac – incompletos

VALORES NORMALES

Una prueba de Coombs indirecta anormal (positiva) significa que usted tiene anticuerpos que actuarán contra los glóbulos rojos que el cuerpo asume como extraños. Esto puede sugerir la presencia de:

• Anemia hemolítica autoinmunitaria o inducida por fármacos
• Eritroblastosis fetal (enfermedad hemolítica)
• Incompatibilidad sanguínea (cuando se utiliza en bancos de sangre)

Uni -Gold™

HIV

Uso

La prueba para HIV Uni-Gold™ de Trinity Biotech es un ensayo individual para la detección de anticuerpos para el virus de la inmunodeficiencia humana 1 y 2 en suero plasma o sangre total.

Fundamento:

El virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) se ha reconocido como el agente etiológico del síndrome de la inmunodeficiencia adquirida (SIDA). El VIH se ha aislado de:

a) Numerosos pacientes con SIDA y desordenes relacionados

b) Miembros asintomáticos de grupo de alto riesgo de SIDA

c) Pacientes sin otros factores de alto riesgo quienes han contraído SIDA después de recibir transfusiones sanguíneas.

La mayoría de los pacientes con SIDA o complejos relacionados con SIDA (ARC)

Tienen anticuerpos para las proteínas estructurales del virus HIV es mas una proporción de miembros de grupos de alto riesgo clínicamente saludables como los homosexuales, hemofílicos y adictos a las drogas son también seropositivos .La infección por HIV se diagnostica mediante la detección de anticuerpos específicos para el virus. Actualmente se conocen dos tipos de HIV, HIV-1, y HIV-2con 40-60% de aminoácidos homólogos entre las dos cepas. La prueba Uni-Gold™ HIV de Trinity es un inmunoensayo rápido basado en el principio del sándwich inmunocromatográfico.

Principios de procedimiento:

Las proteínas recombinantes representando las regiones de las proteínas de la cubierta del HIV-1 y HIV-2, la glucoproteinagp41, gp120 (HIV-1) y la glicoproteína gp368(HIV-2) respectivamente son inmunovilizadas en la región de prueba de la tira de nitrocelulosa. Estas proteínas también se unen al oro coloidal y se impregnan por debajo de la región de la prueba del cartucho, una banda delgada de la membrana de nitrocelulosa también se sensibiliza como una región control.

Recolección y almacenamiento de la muestra:

Se puede utilizar sangre total, suero o plasma.

Sangre total: Si se usa una lanceta para la punción capilar las gotas de sangre se deben tomar de la punta del dedo utilizando la pipeta proporcionada y a partir de esta realizar el procedimiento indicado.

Nota importante: Las muestras de sangre total (MUESTRAS FRESCAS) se deben usar dentro de 10minutos después de su toma para su funcionamiento óptimo del cartucho.

Sangre con anticoagulante: Si la muestra no se puede realizar inmediatamente se puede almacenar durante 3 días de 2-8ºC.

Control de Calidad:

Las buenas prácticas de laboratorio requieren del uso de muestras control para asegurar un funcionamiento adecuado del cartucho por lomenos una vez al dia.

El procedimiento de control de calidad en el cartucho de la prueba indica que la prueba esta funcionando correctamente. Una línea rosa/roja siempre debe aparecer en la ventana control.

Material:

a) Cartucho de prueba.

Cada cartucho de prueba contiene oro coloidal marcado con proteínas HIV recombinantes como zona de prueba y una línea de control.

b) Reactivo de lavado.

Reactivo individual para sangre total suero o plasma.

c) Pipetas desechables.

d) Inserto.

Procedimiento:

1. Si cualquier muestra/reactivo se ha almacenado en refrigeración permita que se atemperen 20 min o temperatura ambiente.

2. Tome el numero necesario de cartuchos de prueba Uni-Gold™ HIV de Trinity Biotech.

3. Marque cada prueba con la información apropiada del paciente

4. Utilizando una de la pipetas proporcionadas tome la muestra (suero/plasma/sangre total).

5. Con la pipeta desechable agregar 2 gotas de muestra

6. Adicione 2 gotas de reactivo de lavado al área de la muestra

7. Permita que transcurran exactamente 10 minutos para que la reacción ocurra. El resultado se debe de leer al final de los 10 minutos del periodo de incubación.

			INVALIDA: La ausencia de una línea en el área de control la prueba se debe de repetir con un cartucho nuevo independientemente de que aparezca una línea en el área de la prueba.
	POSITIVO: Una línea de cualquier intensidad en el área de prueba. Una segunda línea en el área del control indica un resultado positivo.
					NEGATIVO: Una línea en el área control únicamente indica un resultado negativo.

Conclusión:

El SIDA y el ARC son síndromes clínicos y sus diagnósticos pueden solo establecerse clínicamente los resultados de la prueba Uni-Gold™ HIV de Trinity Biotech por si solos no se pueden utilizar para diagnosticar SIDA. Un resultado negativo no excluye de la posibilidad de exposición al VIH o infección con VIH.

Esta prueba suele ser rápida y segura pero no proporciona un 100% de seguridad.

V.D.R.L. Y ROSA DE BENGALA

V.D.R.L.

(Venereal Disease Research Laboratory)

Fundamento: Es una prueba serológica realizada en medicina con sensibilidad y especificidad para complementar el diagnóstico de sifilis.

Cualquier enfermedad por treponema

s causa un VDRL positivo: sífilis, frambesia pinta, bejel, fiebre recurrente, leptospirosis, enfermedad de Lyme y otrasborreliosis. Resul

tados reactivos también resultan con otras enfermedades infecciosas, como tuberculosis, lepra,neumococo, endocarditis infecciosa,mononucleosis infecciosa, neumonías virales, sarampión, varicela, paludismo y tripanosomiasis.

Este examen mide sustancias, llamadas anticuerpos, que se pueden producir en repuesta al Treponema pallidum, la

bacteria que causa la sífilis.

El examen es similar al examen de reagina plasmática rápida (RPR) más nuevo.

Introducción:

La sífilis es una enfermedad venérea causada p

or Treponema pallidum,espiroqueta estrechamente enrollada, de unos 8 a 15um de largo. La enfermedad sin tratar pasa por tres etapas que se pueden prolongar durante muchos años.

La sífilis pocas veces se diagnostica mediante la demostración de organismos en una lesión primaria o secundaria. La fase terciaria que sobreviene después, es el resultado de la hipersensibilidad tisular de los antígenos treponémicos, no de la presencia de importantes microorganismos viables. Las pruebas serológicas son importantes para la demostración del Treponema pallidum, cuyo diagnóstico bacteriológico es muy difícil.

Procedimiento:

Material:

· Placa excavada

· Pipeta semiautomática

· Puntilla

· Reactivo de VDRL

· Muestra de suero

1) Separar el suero, y posteriormente agregar una gota de suero y una de suero control positivo. (en excavaciones diferentes)

2) Añadir una gota de la suspensión del antígeno V.D.R.L. previamente agitado.

3) Mezclar durante 4 min. (tiempo exacto). Puede dar un falso positivo

si se deja reposando o se mezcla mas tiempo

4) Observar al microscopio con el objetivo 10x

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS.

A) Agregados grandes y medianos - Suero positivo.

B) Agregados finos y dispersos - Suero débilmente positivo.

C) No se observan agregados - Suero no positivo.

Se pueden producir falsas reacciones positivas en individuos con cuadros patológicos diversos como hepatitis, influenza, brucelosis, asma, lepra, malaria, tuberculosis, cancer, diabetes y enfermedades autoinmunes.

ROSA DE BENGALA

Fundamento: Prueba de aglutinación rápida en placa para la detección temprana de aglutininas específicas deBrucella (Brucella melitensis, abortus y suis).

La brucelosis es una enfermedad infecciosa producida por el génerobrucella. Es una clásica zoonosis (antropozoonosis) transmisible ocasionalmente al hombre a partir de animales infectados, los cuales eliminan gran número de bacterias a través de los genitales, la leche y las heces.

La brucelosis humana, su denominación técnica, es una de las enfermedades bacterianas más comunes del planeta. Se llama así en honor de Davis Bruce, médico militar que en 1887 aisló el agente patógeno del bazo de soldados británicos acuartelados en la isla de Malta. La bacteria recibió el epíteto del nombre latino de la isla: Microccocus melitensis (hoy, Brucella melitensis).

TRANSMICION

Introduccion:

Aglutinación.

En sus diferentes modalidades, es la prueba más utilizada debido a su rapidez y sensibilidad

Rosa de Bengala: Es la prueba mas empleada por permitir una aproximación diagnóstica inmediata. De especial utilidad en zonas no endémicas, en las que se realiza como método de "despistaje". Utiliza como antígeno una suspensión bacteriana a la que se ha añadido el colorante rosa de bengala, enfrentándola al suero sin diluir del enfermo. Proporciona una aproximación diagnóstica en pocos minutos con una sensibilidad y especificidad muy altas. Presenta elevado grado de correlación con la seroaglutinación y, por su simplicidad, es muy útil como prueba de despistaje inicial o screening. Sus falsos negativos se limitan a enfermos con procesos de pocos días de evolución y a algunos casos de enfermedad de curso muy prolongado.

PROCEDIMIENTO:

Material:

· Suero (sangre)

· Reactivo de rosa de bengala

· Placa excavada

· Pipeta semiautomática

1. Llevar a temperatura ambiente el reactivo, controles y muestras de suero.

2. Utilizando la pipeta automática adicione 30 µL de la muestra del paciente en un círculo de la placa.

3. Mezcle suavemente el Antígeno Rosa de Bengala hasta que se encuentre totalmente homogéneo, después coloque 30 µL en la placa de prueba, en

el mismo circulo donde se coloco la muestra del paciente, mezcle ambas con un aplicador. (usar un aplicador diferente para cada muestra). Repita este paso para cada muestra de paciente y controles.

4. Agitar la placa con movimientos rotatorios por 4 minutos.

5. Con la ayuda de una fuente de luz directa lea el resultado.

Importante: Después de este tiempo la lectura ya no es válida. La lectura debe llevarse a cabo exactamente a los 4 minutos tomados a partir de que se comenzó a mezclar. Este es un tiempo límite óptimo en el que se da un espacio para la observación de ciertas aglutininas que se revelan lentamente y que de otra manera se pueden omitir, además de que se pueden presentar reacciones no específicas.